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      引物合成,DNA合成
      鼎國昌盛生物引物合成服務采用192道高通量合成儀和全進口試劑。提供各種純度的產品,滿足不同實驗的需要。
      編號:HC 規格:
      價格: 數量:
      產地:

       引物合成服務

          鼎國昌盛生物擁有數臺POLYPLEX 合成儀,這是目前最好的高通量合成儀之一,月產能100萬堿基。更有自主研發設計的吊籃式離心真空干燥機,應用于引物合成,使板式合成、板式純化、板式定量得以全面實現。

      引物合成---HEPD純化:

       堿基數

      產量

      價格

      6-9bases

      ≤1OD

      16元/條

      1-2OD(含)

      20元/條

      >2OD

      需要的OD數除以2向上取整再乘以2OD的價格

      10-50bases

      ≤2OD

      1.4元/堿基

      2-5OD(含)

      1.6元/堿基

      5-10OD(含)

      2.0元/堿基

      >10OD

      需要的OD數除以10向上取整再乘以10OD的價格

         引物合成---PAGE純化:

       

       

      價格

      10-50bases

      ≤2OD

      1.6元/堿基

      2-5OD(含)

      2.0元/堿基

      >5OD

      需要的OD數除以5向上取整再乘以5OD的價格

      51-70bases

      ≤2OD

      2.5元/堿基

      2-5OD(含)

      3.0元/堿基

      >5OD

      需要的OD數除以5向上取整再乘以5OD的價格

      71-90bases

      ≤2OD

      4.0元/堿基

      2-5OD(含)

      6.0元/堿基

      >5OD

      需要的OD數除以5向上取整再乘以5OD的價格

      91-110bases

      ≤1OD

      6.0元/堿基

      1-2OD(含)

      8.0元/堿基

      >2OD

      需要的OD數除以5向上取整再乘以5OD的價格

       

      建議您使用本公司網站上提供的引物合成訂單表格填寫訂單。

         

      鼎國昌盛生物引物合成服務詳細說明:

      1 我們引物合成報告單上的所有數據都是由軟件系統根據同一組原始數據自動計算生成的。報告單里包含每條oligo的分子量、OD數、每ODnmole數、兩種離子濃度下的TM值、GC含量等參數信息。所以該編號Oligo DNA的實際序列與引物合成報告單上打印的完全一致。如果打印序列與你的定單不同請立即與我們聯系。

       

      2 我們使用紫外分光光度計Oligo DNA進行定量。在1cm光程260nm波長下的吸光度(A值),即為1mL該溶液中含Oligo DNAOD數。根據文獻數據,1OD260的單鏈寡核甘酸大約相當于33μg,但受堿基組成的影響較大。我們通過軟件為每條寡核甘酸提供了更準確的nmol數。

       

             也可以作以下近似計算:摩爾數=OD數×33μg/OD÷(堿基數×324.5g/mol)。

       

      3 TM值的選擇。

       

      我們提供兩種[Na]當量離子濃度下的TM值。典型PCR反應體系的[Na]當量濃度一般在0.2M-0.5M之間。普通PCR反應建議第一次摸索條件時使用0.05M[Na]當量下上下游引物的TM平均值;如果用于接頭退火建議使用1M[Na]當量下的TM值。

       

      4 引物合成中的耦合效率(Coupling Efficiency)是根據合成最后一個堿基時脫下來的DMT保護基的量與合成第二個堿基時脫下來的DMT保護堿基的量的比值計算出來的。它反映的是一個平均耦合效率。引物原始質量的好壞主要體現在這些合成和氨解的化學反應上,如果這些步驟出了問題,一般的純化都將無法彌補其造成的影響。

       

      5 高質量的DNA應該是呈透明的薄膜狀附在離心管底部或管壁。也有少量為白色粉末(跟序列有關)。開蓋溶解前請先離心,避免損失。我們推薦用螺旋管裝盛引物,這樣能避免壓蓋管開蓋帶來的損失。

       

      6 Oligo的稀釋與保存。我們普通PCR引物的建議溶解濃度為10μM(10pmol/μl),反應濃度為0.2μM(0.2pmol/μl)。稀釋到10μM濃度需加TEbuffer(或者雙蒸水)的體積(μl=每管的OD*nmol/OD*100。常規引物在干粉狀態下能-20℃保存一年。

       

      7 關于PCR反應體系。建議配合使用我們公司提供的酶和buffer,能使您的實驗達到最佳效果。

       

      8 熒光標記的稀釋與保存。FAMFITCHEXTETcy3cy5等對光敏感的基團,在運輸和使用過程中應盡可能避光保存。cy3cy5標記的引物在堿性條件下容易降解,所以此類引物不宜用TE溶液溶解,應于中性條件下-20℃避光保存。

       

      9 我們提供的Oligo DNA5’端和3’端均為羥基,若需要磷酸基團的必須另作處理。

       

      10 您的所有引物合成的信息我們將嚴格保密,兩年內隨時供您查詢。

       

      11 我們還將為您保留少量樣品,如果您不小心丟失或者用量不夠,我們可以免費再提供小樣。

       

      12 如果您提供模板序列或者NCBI基因序列號,我們為您可以免費設計引物。經您確認后,再將合成好的引物送到您處。需要說明的是引物設計有一定的風險,根據實驗不同成功率可以從50%-99%。我們不承擔此類風險責任。

       

      13 如果您在到貨后一個月內未提出異議,我們將視此產品為合格,不再受理索賠事宜。

       

      14 常用簡并堿基代碼:

      M

      R

      W

      S

      K

      Y

      V

      D

      H

      B

      N

      A\C

      A\G

      A\T

      G\C

      G\T

      C\T

      A\G\C

      A\G\T

      A\C\T

      G\C\T

      A\G\C\T

      引物合成常見問題

      Q1.引物合成的過程?引物是如何合成的?

      目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。DNA合成儀有很多種,無論采用什么機器合成,合成的原理都相同,主要差別在于合成產率的高低,試劑消耗量的不同和單個循環用時的多少。

      (1)    去保護:加入Deblocking脫去堿基上5'- OH的保護基團DMT,獲得游離的5'- OH

      (2)    耦合:同時加入活化劑和新的堿基,新的堿基5'-OH仍然被DMT保護,3'端被活化與溶液中游離的5'-OH發生耦合反應;

      (3)    封閉:耦合反應中極少數5'- OH沒有參加反應,用封閉試劑終止其后繼續發生反應;

      (4)    氧化:加入氧化劑使其由核苷亞磷酸酯形成更穩定的核苷磷酸酯。

      Q2.引物合成如何處理?

      切割與脫保護基:將合成好的寡核苷酸鏈從支持物上化學切割下來。常用新鮮的濃氨水來裂解CPG與初始核苷之間的酯鍵。斷裂下來的寡核苷酸帶有自由的3’羥基。

      純化:根據所合成寡核苷酸的組成和應用來選定純化的方法。常用的純化方法有:C18、OPC、PAGE和HPLC。

      定量:根據寡核苷酸在260nm處的紫外吸收來定量。

      儲存:分裝抽干。

      Q3.合成的引物5’端是否有磷酸化?

      合成的引物5’為羥基,沒有磷酸基團。如果需要您可以用多核苷酸激酶進行5’端磷酸化,或者要求我們合成時直接在5’或3’端進行磷酸化,需要另外收費。

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      京公網安備 11011402011307號

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