技術流程

 AFLP分子標記技術服務常見問題

 1）客戶委托公司做實驗服務，客戶需要做哪些工作？

    客戶只需提供實驗材料，我們負責DNA提取及后續全部試驗。收到樣品后，我們

一般會給客戶做預實驗，根據客戶預實驗結果，客戶滿意度，決定是否安排后續實

驗。公司現有64個引物組合，全部為FAM熒光標記，我們會從中篩選條帶清晰、多

態性較好的引物組合給客戶。在開始正式實驗前，客戶需支付課題服務一半的費用

，余款在公司給客戶發送最后一批數據前，一次結清。

2) 關于AFLP收費價格

    目前我們的基本價格是30個樣，6~8對引物，6000元，實驗周期大約為20天，如果您

樣品較多或引物組合較多，具體協商。

3）條帶數太多

   PCR產物在ABI測序儀上電泳，檢測系統的靈敏度要比銀染高的多，數據分析是通過

GENESCAN軟件進行分析，所以對于很弱的帶，如果人工統計的話，不會把這樣的

帶統計進去，但軟件分析的話，會讀到這樣的帶。所以通過測序儀檢測比銀染條帶

數多，這個可以理解。另外我們一般通過控制熒光信號強度來控制條帶數，對于擴

增強以及擴增相對較弱的引物，通過控制熒光信號強度，盡量保證條帶數在50~60條

，最大限度減少由于擴增強度的問題，引起的條帶數的差異，最真實的反映實驗結

果。

4）能否找到所有差異帶的具體位置，并回收克隆差異條帶？

    請參照提供數據結果中，原始數據部分，數據表中，每個檢測位點都有片段大小，

有帶的地方是片段的實際大小，無帶的為0，很容易找到差異帶。目前我們采取的熒

光引物，跑測序膠，只能指出差異帶的具體位置及片段大小，不能夠回收克隆差異

帶。

5）共有譜帶較少，多態性太高

   共有譜帶為所有樣品在某一位點擴增后共有的條帶。因此只要有一個樣品的擴增不

好，或者在這個樣品無擴增，就會導致共有普帶數較少或沒有。所以一定要保證實

驗材料新鮮，這樣我們才能夠保證后續試驗中的PCR擴增沒問題。如果樣品確實有問

題，為了不影響整體數據要去除這類樣品。